，也能够由寄生虫感染、摄入化学毒物或药物引起。肠炎一般表现为胃口下降、厌恶吐逆、腹部疼痛等，会导致养分吸收妨碍、消化不良、排便反常等，严重者或许会产生肠道出血、肠穿孔乃至癌变，影响到患者的正常日子，组方中含山楂、枇杷叶、枳实、连翘、桔梗等多种苦寒中药，改进积食和通便的效果杰出。方中枇杷叶具有清肺止咳、降逆止呕的成效，现代研讨标明其有抗炎祛痰、抗氧化、止呕等药理活性。枳实、莱菔子能用于泻痢后重、大便不通等证，研讨标明枳实有促进肠胃活动，维护胃肠屏障，按捺炎症加剧的效果）诱导的小鼠肠道炎症模型，并结合中药成分靶点“钩钓”战略，对小儿消积止咳口服液调理肠道功用及潜在靶点蛋白进行了体系研讨，从而根据靶点的生物学功用探讨了小儿消积止咳口服液改进肠道功用的效果机制。

　　小儿消积止咳口服液冻干，得到小儿消积止咳口服液总提取物，于4℃的枯燥环境下保存备用。称取1 g小儿消积止咳口服液总提取物，参加50 mL纯净水溶解，配成20 mg/mL的母液；取10 mL母液，用30 mL纯净水稀释成5 mg/mL药液备用。

　　将FeCl3溶于乙二醇，一起参加乙酸钠和柠檬酸钠，溶解后200℃反响9 h，组成空白磁性微球。经过与二巯基丁二酸于50℃恒温孵育，使其外表润饰巯基后，参加L -赖氨酸三异氰酸酯将已润饰巯基的磁性微球与二苯甲酮衔接，即完结外表化学物的润饰。取磁性微球5 mg涣散于20 mL甲醇溶液，精确称量5 mg小儿消积止咳口服液提取物溶解于上述体系，将反响体系置于反响器中，通氮气30min，紫外照耀1 h后，用PBS溶液清洗得到键合小儿消积止咳口服液提取物的磁性微球，备用[10]。

　　32只雄性BALB/c小鼠随机分为对照组、模型组和小儿消积止咳口服液提取物低、高剂量（50、200 mg/kg）组，每组8只。各给药组ig 200 μL相应药物，对照组ig 200 μL生理盐水，1次/d，接连5 d；除对照组外，其他各组小鼠在末次给药时ip 200 μL LPS，树立小鼠肠炎模型，对照组ip 200 μL生理盐水，养殖12 h。按表1对各组小鼠的状况进行评分后，小鼠麻醉处死，解剖并完好取出肠安排，用生理盐水清洗后置于冰上留用。

　　各组小鼠肠安排参加裂解液，将肠安排蛋白裂解液分为9份，设置空白组、结合组和竞赛组，每组3个重复。空白组参加未键合药物成分的空白磁性微球；结合组参加键合小儿消积止咳口服液提取物的磁性微球；竞赛组先将安排裂解液与10 mg/mL小儿消积止咳口服液提取物于4℃孵育1 h，再参加键合小儿消积止咳口服液提取液的磁性微球，4℃孵育8 h，用0.5%十二烷基硫酸钠溶液洗脱杂蛋白，进行后续试验。

　　使用nano-HPLC-LTQ-Orbitrap/MS判定捕获的蛋白。将各组磁性微球捕获的蛋白用胰酶消化后，经0.22 μm微孔滤膜滤过并进样剖析。色谱条件：活动相为0.1%甲酸水溶液（A）-0.1%乙腈水溶液（B）；洗脱条件为：0～70min，2%～40% B；70～75min，40%～95% B。串联质谱选用线性离子肼静电场轨迹肼质谱仪（LTQ-Orbitrap Velos Pro），一级质谱选用Orbitrap检测，分辩率m/ z 400处为60000；收集质量范围为350～2000 m / z，顺次选取一级质谱中离子强度最强的15个离子进行CID二级串联质谱剖析。

　　根据质谱检测成果，挑选出（结合组质谱强度－空白组质谱强度）与（竞赛组质谱强度－空白组质谱强度）比值大于2的蛋白。将挑选得到的差异蛋白输入Cytoscape软件，使用其间的ClueGO进行KEGG剖析，种属设置为小鼠，阈值为P＜0.05，其他均选用默许参数。

　　各组小鼠肠安排置于4%多聚甲醛中固定并制成蜡块备用。依照试剂盒阐明书别离制备TNF-α、IL-6、Occludin、Claudin-1、C-kit、HSP60的免疫组化切片和HE染色切片，选用Nikon DS-U3型成像体系扫描成像，并用NDP.view 2软件进行剖析。

　　如表2所示，LPS诱导后的小鼠状况显着变差，存在竖毛、蜷缩、排便困难等病理特征；各给药组小鼠毛发润滑，全体更生动，解剖发现各给药组小鼠肠安排水肿症状也有改进（图1-A）。HE染色成果（图1-B）显现，LPS诱导后的小鼠肠道结构被损坏，肠黏膜及黏膜基层有显着的炎症细胞滋润；各给药组小鼠肠道炎症细胞滋润显着削减，特别高剂量组的肠道完好性和炎症程度与对照组附近。

　　根据键合小儿消积止咳口服液的磁性微球从LPS诱导的小鼠肠道安排捕获靶点，经过高分辩质谱对靶点蛋白进行判定（图2-A），累计发现了1333个潜在结合蛋白（图2-B）。依照（结合组质谱强度－空白组质谱强度）与（竞赛组质谱强度－空白组质谱强度）的比值大于2，（结合组质谱强度－空白组质谱强度）与（竞赛组质谱强度－空白组质谱强度）进行组内t查验，设置P≤0.05的条件，挑选得到20个与小儿消积止咳口服液药理效果直接相关的靶点蛋白（图2-C）。根据KEGG剖析成果，对这20个靶点蛋白功用进行阐明。

　　综上能够估测，小儿消积止咳口服液提取物或许经过靶向多种不同功用的靶点蛋白群，包含促进肠道活动、调控肠道炎症与免疫功用、保持肠道细胞的正常代谢以及按捺肠道上皮细胞凋亡，终究发挥改进肠道病理状况的效果。

　　间质细胞在保持胃肠动力中发挥重要效果，而C-kit是一种酪氨酸蛋白激酶受体，在Cajal间质细胞中广泛表达[24]。免疫组化成果显现，模型组肠安排C-kit表达与对照组比较显着下降；与模型组比较，各给药组肠安排C-kit表达有显着添加（图3-A）。鉴于肠道动力和肠道细胞的线粒体能量代谢关系密切，而HSP60可作为点评细胞线粒体功用状况的标志物[25]。免疫组化成果显现，模型组与对照组比较HSP60表达显着削减，各给药组与模型组比较HSP60表达添加（图3-B），提示小儿消积止咳口服液能够维护线粒体及其功用。此外，柠檬酸合酶（citratesynthase，CS）和ATP合酶b（ATP synthase b subunit，ATPb）是线种要害酶，使用qRT-PCR检测其mRNA表达量发现，模型组肠安排CS和ATPb mRNA表达量显着削减（P＜0.05、0.01），给药组后上述2个目标mRNA表达量显着上升（P＜0.05、0.01，图3-C、D）。标明小儿消积止咳口服液能够有用促进Cajal间质细胞的增殖，一起促进肠道细胞线粒体中ATP的组成并加强能量代谢，从而保持小肠正常运动功用。

　　4-A、B所示，TNF-α和IL-6在正常肠道安排中几乎没有表达，而在模型组中两者水平有显着升高；与模型组比较，给予小儿消积止咳口服液后的肠道安排中TNF-α和IL-6表达显着削减，阐明小儿消积止咳口服液具有显着按捺肠道炎症的效果。

　　Claudin-1和Occludin是点评肠道细胞细密性的重要目标。如图4-C、D所示，对照组肠道安排中Claudin-1和Occludin均有表达，且对照组细胞完好，细胞细密性好；与对照组比较，模型组Claudin-1和Occludin表达显着削减，细胞空隙增大；而给予小儿消积止咳口服液后的肠道安排损害有所减轻，Claudin-1和Occludin的表达也显着添加。估测小儿消积止咳口服液能够有用按捺肠道炎症反响，从而维护肠道内皮细胞，保持肠安排黏膜的细密性与完好性。4评论

　　LPS诱导的小鼠肠炎，其效果机制或许与增强肠道动力、改进肠道免疫微环境以及保持肠道黏膜完好性有关。

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